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2 × Magic Green Taq SuperMix 产品名称 :2 × Magic Green Taq SuperMix
货号:21502
规格:1x10ml
单价380元促销价50元在线咨询

产品说明书常见问题相关文献

#21502 Magic Green Taq.pdf
Q1: 实验组无产物或少量产物。
A1：
1模板
粗提取模板中存在PCR抑制物影响实验结果，建议减少模板使用量或重新制备高纯度模板；
长期4℃放置、反复冻融会导致模板降解、断裂或开环，建议长期保存于-20℃或使用新鲜制备的模板；
模板GC含量过高或过低，建议摸索合适的退火温度；
若模板为cDNA，确保逆转录所用RNA的纯度及完整度。
2引物
检查引物是否因保存方式不当而降解，建议适当提高引物浓度，引物溶解后，短期使用4℃保存，长期不使用建议-20℃保存；
引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
3酶
因保存或运输不当导致酶活力降低或失活，建议提高酶的使用量或更换新酶重新进行实验。
4反应程序
检查延伸时间是否合适，摸索合适的退火温度，循环数增加至35-40个循环。
5反应体系
反应体系配制错误，建议重复实验；
反应体系中Mg2+的浓度不合适，Mg2+浓度过低可降低PCR产量甚至使PCR扩增失败，Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性，建议适当调整Mg2+浓度。

Q2：扩增产物有杂带或弥散条带。
A2：
1 引物
引物设计不合适。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体，引物浓度偏高，建议降低引物浓度至终浓度为0.2 μM，必要时需重新设计引物。
2 模板
模板浓度不准，导致加入模板不足或过量，可通过核酸胶电泳检查模板浓度是否准确，模板用量请参考反应体系推荐量调整。
模板不纯被污染，建议重新制备模板。
3 酶
酶量加入过多，减少酶使用量。
4 反应程序
提高退火温度；可间隔2℃设置至65℃；
出现比目的条带小的杂带，可通过提高退火温度，减少反应循环数改善；
出现比目的条带大的杂带，可通过缩短延伸时间，减少反应循环数改善。

Q3：空白对照出现扩增产物。
A3：
1 若扩增产物条带与目的片段大小一致，说明体系有污染
更换新的Mix、引物或ddH2O重复实验。在超净台配置反应体系，减少气溶胶污染。
2操作过程不规范，交叉污染
操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外，避免交叉污染。
3 使用巢式PCR方法减轻或消除靶基因受到空气中的小片段核酸污染。

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Q1: 实验组无产物或少量产物。

Q2：扩增产物有杂带或弥散条带。

Q3：空白对照出现扩增产物。