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2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix Universal
产品名称：2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix Universal
货 号：22204
规 格：5×1 mL
单价1100元 促销价299元
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#22204 2xQ3 SYBR qPCR Master Mix Universal-A4-V9.1.2-20230704.pdf
A1:
1.1扩增曲线不光滑：信号太弱，经系统矫正后产生。提高模板浓度重复实验。
1.2扩增曲线断裂或下滑：模板浓度较高，基线的终点值大于Ct值。减小基线终点（Ct值减4），重新分析数据。
1.3个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡。处理样本时要注意离心，进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。
A2:
2.1 反应循环数不够：一般设置循环数为40, 但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号，降低数据可信度。
2.2确认程序中是否设置了信号采集步骤：两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。
2.3确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性，以排除其降解的可能。
2.4模板浓度太低：减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。
2.5模板降解：重新制备模板，重复实验。
A3:
3.1 扩增效率极低：优化反应条件，尝试三步法扩增程序，或者重新设计合成引物。
3.2 板浓度太低：减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。
3.3 模板降解：重新制备模板，重复实验。
3.4 PCR产物太长：推荐PCR产物长度为80-150 bp。
3.5 体系中存在PCR抑制剂：一般为模板带入，加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。
A4:
4.1 反应体系污染：更换新的Master Mix、水、引物重复实验。反应体系在超净工作台内配置，减少气溶胶污染。
4.2 引物二聚体的出现：配合熔解曲线进行分析。
A5:
5.1 加样误差：提高模板稀释倍数，提高加样体积。
5.2 标准品降解：重新制备标准品，重复实验。
5.3 模板浓度太高：提高模板稀释倍数。
A6:
6.1 引物设计不优：根据设计原则设计合成新的引物。
6.2 引物浓度太高：适当降低引物浓度。
6.3 cDNA模板带有基因组污染：重新制备cDNA模板。
A7:
7.1 加样体积不准：使用性能较好移液器或将模板多倍稀释后再提高加入反应体系的模板体积。
7.2 定量PCR仪不同位置温度控制不一致：定期校准仪器。
7.3 模板浓度太低：模板浓度越低，重复性越差，减少模板稀释度或提高加样体积。
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